Survivin shRNA促进HL-60细胞凋亡及其对阿糖胞苷敏感性的研究
A Study of Survivin Gene to Promote Apoptosis of HL-60 Cells and Its Effect on the Sensitivity of Ara-C to the Cells
目的:本研究通过构建Survivin特异性shRNA(short hairpin RNA)真核表达载体、利用Lipofectamine 2000TM脂质体转染到HL-60细胞,研究Survivin基因对白血病细胞凋亡及阿糖胞苷敏感性的影响.方法:(1)通过半定量RT-PCR扩增和定向克隆技术构建重组真核表达载体pshRNA-Survivin1(阳性)、pshRNA-Survivin2(阴性).(2)实验分六组:空白实验组,Ara-C组,pshRNA-Survivin1(阳性)组,pshRNA-Survivin2(阴性)组,pshRNA-Survivin1(阳性)+Ara-C组pshRNA-Survivin2(阴性)+Ara-C组.(3)用无内毒素质粒大提试剂盒提取质粒,通过脂质体的介导转染HL-60细胞.(4)转染48h后,通过RT-PCR检测HL-60细胞中Survivin mRNA的表达,并通过流式细胞仪检测细胞的凋亡情况.(5)所得数据采用SSPS11.0统计软件进行分析,计量资料统计学数据用均数±标准差(X±S)表示.检验标准以P<0.05为有统计学意义.结果:(1)成功构建了重组质粒载体pshRNA-Survivin1(阳性)、pshRNA-Survivin2(阴性),经测序证实插入的ShRNA-Survivin序列正确.(2)通过RT-PCR检测HL-60细胞中Survivin mRNA的表达结果为:空白实验组,Ara-C组,转染pshRNA-Survivin1 (阳性)质粒组,转染pshRNA-Survivin2(阴性)质粒组,转染pshRNA-Survivin1(阳性)质粒+Ara-C组,转染pshRNA-Survivin2(阴性)质粒+Ara-C组的Survivin mRNA的相对表达量分别为0.83±0.01,0.80±0.02,0.35±0.02,0.77±0.01,0.17±0.01,0.75±0.02.同空白实验组比,转染pshRNA-Survivin1(阳性)质粒组细胞的Survivin mRNA表达抑制率为57.8%,转染pshRNA-Survivin1(阳性)质粒加阿糖胞苷组细胞的Survivin mRNA表达抑制率为79.5%.表明shRNA对HL-60细胞中的Survivin mRNA表达抑制是高效特异的,同时提高了HL-60细胞对阿糖胞苷的敏感性,差异具有统计学意义(P<0.05).(3)通过流式细胞仪检测细胞的凋亡,结果显示六组的凋亡指数分别为:空白实验组:基本无凋亡,Ara-C组:5.09±0.30%,转染pshRNA-Survivin1(阳性)质粒组:5.87±0.38%,转染pshRNA-Survivin2(阴性)质粒组:2.78±0.30%,转染pshRNA-Survivin1(阳性)质粒+Ara-C组12.4±0.38%,转染pshRNA-Survivin2(阴性)质粒+Ara-C组:8.80±0.32%,差异具有统计学意义(P<0.05).结论:(1) Survivin特异性shRNA真核表达载体构建成功.(2)转染Survivin特异性shRNA真核表达载体后,HL-60细胞中的Survivin mRNA表达受到抑制.(3)利用RNA干扰Survivin基因后,可以提高HL-60细胞对阿糖胞苷的敏感性,促进细胞凋亡(4)利用RNA干扰技术抑制Survivin基因可能是白血病基因治疗的一种有效途径.
- 作者：
- 赵震宇
- 学位授予单位：
- 昆明医学院
- 专业名称：
- 血液内科学
- 授予学位：
- 硕士
- 学位年度：
- 2011年
- 导师姓名：
- 张铀
- 中图分类号：
- R733.7
- 关键词：
- Survivin基因；RNA干扰；细胞凋亡；急性髓细胞白血病
- Survivin gene；RNA interference；cell apoptosis；Acute myelogenous leukemia